蛋白質(zhì)合成抑制劑，可用于植物細(xì)胞培養(yǎng)等生化研究。
潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成，從而殺死原核（如細(xì)菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動物真核細(xì)胞。
大腸桿菌（ Escherichia coli.）來源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶，將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物，從而起到解毒作用。針對這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標(biāo)記，用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。另外，由于作用模式的差異，常與G418 (Cat：G8161)，Zeocin（Cat：Z8020）和Blasticidin S（Cat：B9300）聯(lián)合使用進(jìn)行雙抗性陽性細(xì)胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑，因其選擇性滲透進(jìn)入因病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞，且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動物飼料中起到驅(qū)蟲功能。
本品是無菌的潮霉素B溶液（100mg/ml），可直接用培養(yǎng)液稀釋使用。
使用方法

1.  常用篩選濃度

注意：潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素最低濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的最低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）     轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷效果最好。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%。

2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

注意事項(xiàng)

1） 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了來自E. Coli.之外，還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

2） 本品為有毒化合物，避免與皮膚和眼睛接觸，請小心操作。

3） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

備注：產(chǎn)品信息可能會有優(yōu)化升級。請以實(shí)際標(biāo)簽信息為準(zhǔn)。

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標(biāo)題:Aberrant m5C hypermethylation mediates intrinsic resistance to gefitinib through NSUN2/YBX1/QSOX1 axis in EGFR-mutant non-small-cell lung cancer

成員:Wang Yueqin, Wei Jingyao, Feng Luyao, Li Ouwen, Huang Lan, Zhou Shaoxuan, Xu Yingjie, An Ke, Zhang Yu, Chen Ruiying, He Lulu, Wang Qiming, Wang Han, Du Yue, Liu Ruijuan, Huang Chunmin, Zhang Xiaojian, Yang Yun-gui, Kan Quancheng, Tian Xin

論文因子:41.444 發(fā)表期刊:Molecular Cancer pmid:37161388

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標(biāo)題:The transcription factor Ste12-like increases the mycelial abiotic stress tolerance and regulates the fruiting body development of Flammulina filiformis

成員:Xiaomeng Lyu, Qingji Wang, Ao Liu, Fang Liu, Li Meng, Panmeng Wang, Yan Zhang, Li Wang, Zhuang Li, Wei Wang

論文因子:6.064 發(fā)表期刊:Frontiers in Microbiology pmid:37213522

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標(biāo)題:An effective method for establishing a regeneration and genetic transformation system for Actinidia arguta

成員:Wantian Yao, Lingling Kong, Diya Lei, Bing Zhao, Honglan Tang, Xuan Zhou, Yuanxiu Lin, Yunting Zhang, Yan Wang, Wen He, Mengyao Li, Qing Chen, Ya Luo, Xiaorong Wang, Haoru Tang, Yong Zhang

論文因子:5.6 發(fā)表期刊:Frontiers in Plant Science pmid:37583592

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標(biāo)題:A genetic screen in combination with biochemical analysis in Saccharomyces cerevisiae indicates that phenazine-1-carboxylic acid is harmful to vesicular trafficking and autophagy

成員:Xiaolong Zhu, Yan Zeng, Xiu Zhao, Shenshen Zou, Ya

論文因子:4.259 發(fā)表期刊:Scientific Reports 7, Article number: 1967 (2017) pmid:28512289

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標(biāo)題:Iron overload increases the sensitivity of endometriosis stromal cells to ferroptosis via a PRC2-independent function of EZH2

成員:Yong Luo, Liping Li, Qiwen Hu, Ziyu Zhang, Faying Liu, Yongbao Peng, Yang Zou, Lina Chen

論文因子:4 發(fā)表期刊:INTERNATIONAL JOURNAL OF BIOCHEMISTRY & CELL BIOLOGY pmid:38417568

注意：以上文獻(xiàn) 僅供參考

潮霉素B(液體) 31282-04-9

潮霉素B(液體) 31282-04-9