說明：蛋白質(zhì)合成抑制劑。抑制細菌、藻類原生物和哺乳動物細胞生長。

嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑鏈霉菌（Streptomyces alboniger）發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽性菌，各種動物和昆蟲細胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。作用機制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的類似物，能夠與核糖體的A位點結(jié)合并摻入到延伸的肽鏈中。嘌呤霉素同A位點結(jié)合后，不會參與隨后的任何反應，從而導致蛋白質(zhì)合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

嘌呤霉素產(chǎn)生菌Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶（PAC），賦予機體對嘌呤霉素產(chǎn)生抗性。這一特性如今普遍應用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。

嘌呤霉素在細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選中的普遍應用與慢病毒載體的特性有關，現(xiàn)在商業(yè)化的慢病毒載體多數(shù)都攜帶pac基因。在某些特定情況下，嘌呤霉素亦可以用來篩選轉(zhuǎn)化攜帶pac基因質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。

使用方法

1.建議使用濃度

哺乳動物細胞：1-10 μg/mL，最佳濃度需要殺滅曲線來確定；

大腸桿菌：LB瓊脂培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)化pac基因的大腸桿菌，使用濃度為125μg/mL。注：使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌穩(wěn)轉(zhuǎn)株需要精確的pH值調(diào)節(jié)，而且受宿主細胞本身的影響。

2. 嘌呤霉素殺滅曲線的確定（以shRNA轉(zhuǎn)染或者慢病毒轉(zhuǎn)導為例）

嘌呤霉素有效篩選濃度跟細胞類型、生長狀態(tài)、細胞密度、細胞代謝情況及細胞所處細胞周期位置等有關。為了篩選到穩(wěn)定表達的shRNA細胞株，確定殺死未轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導細胞的最低濃度嘌呤霉素至關重要。建議初次做實驗的客戶一定要建立適合自身實驗體系的殺死曲線（kill curve）。

1） Day 1：24孔板內(nèi)以5~8 x 104 cells/孔的密度鋪板，鋪足夠量的孔以進行后續(xù)的梯度實驗。37℃細胞孵育過夜；

2） Day 2：a）準備篩選培養(yǎng)基：含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基（如0-15μg/mL，至少5個梯度）；b）往孵育過夜后的細胞內(nèi)更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基；之后37℃孵育細胞；

3） Day 4：更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，并觀察細胞存活率。

4） 根據(jù)細胞的生長狀態(tài)，約2-3天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基；

5） 每日監(jiān)測細胞，觀察存活細胞率，從而確定抗生素篩選開始4-6天內(nèi)有效殺死非轉(zhuǎn)染或者所有非轉(zhuǎn)導細胞的藥物最低濃度。

3. 哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的篩選

等轉(zhuǎn)染含有pac基因的質(zhì)粒后，細胞在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中增殖，以篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子。

1）細胞轉(zhuǎn)染48h后，將細胞（原樣或稀釋）置于含有適當濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

注意：當細胞處于分裂活躍期時，抗生素作用最明顯。細胞過于密集，抗生素產(chǎn)生的效力會明顯下降。最好進行細胞分盤使其密度不超過25%。

2）每隔2-3天，移除和更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基。

3）篩選7天后評估細胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時間，這依賴于宿主細胞系和轉(zhuǎn)染篩選效率。注意：每日進行細胞生長狀態(tài)的觀察。嘌呤霉素的篩選至少需要48h，有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在3-10天。

4）轉(zhuǎn)移和放置5-10個抗性克隆到一個35mm的培養(yǎng)皿中，用選擇培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7天。此次富集培養(yǎng)是為日后的細胞毒性實驗做準備。

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2）嘌呤霉素為有毒化合物，操作時請小心拿放。

  備注：產(chǎn)品信息可能會有優(yōu)化升級。請以實際標簽信息為準。

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標題:Palmitoylation alters LDHA activity and pancreatic cancer response to chemotherapy

成員:Luojun Chen, Xiaoke Xing, Yue Zhu, Yali Chen, Huadong Pei, Qibin Song, Juanjuan Li, Pingfeng Zhang

論文因子:9.7 發(fā)表期刊:CANCER LETTERS pmid:38331089

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標題:CD97 inhibits osteoclast differentiation via Rap1a/ERK pathway under compression

成員:Wang Wen, Wang Qian, Sun Shiying, Zhang Pengfei, Li Yuyu, Lin Weimin, Li Qiwen, Zhang Xiao, Ma Zhe, Lu Haiyan

論文因子:14.9 發(fā)表期刊:International Journal of Oral Science pmid:38311610

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標題:Aggresome formation promotes ASK1/JNK signaling activation and stemness maintenance in ovarian cancer

成員:Chen Yurou, Qiang Yulong, Fan Jiachen, Zheng Qian, Yan Leilei, Fan Guanlan, Song Xiaofei, Zhang Nan, Lv Qiongying, Xiong Jiaqiang, Wang Jingtao, Cao Jing, Liu Yanyan, Xiong Jie, Zhang Wei, Li Feng

論文因子:16.6 發(fā)表期刊:Nature Communications pmid:38351029

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標題:Exosome Heterogeneity Affects the Distal “Barrier-Crossing" Trafficking of Exosome Encapsulated Quantum Dots

成員:Di Wu, Hang Sun, Bingwei Yang, Erqun Song, Yang Song, Weihong Tan

論文因子:17.1 發(fā)表期刊:ACS Nano pmid:38394382

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標題:Liensinine, a Novel and Food-Derived Compound, Exerts Potent Antihepatoma Efficacy via Inhibiting the Kv10.1 Channel

成員:Biao Ma, Sai Shi, Wei Guo, Hailin Zhang, Zhen Zhao, Hailong An

論文因子:6.1 發(fā)表期刊:JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY pmid:38382537

注意：以上文獻 僅供參考

嘌呤霉素 58-58-2

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