苯基-瓊脂糖凝膠H.P.是將苯基鍵合在瓊脂糖凝膠上形成的一種可利用疏水相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品純化分離的疏水類介質(zhì)。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。

1外觀

本品為白色球狀凝膠,無(wú)嗅、無(wú)味、無(wú)肉眼可見雜質(zhì)。

2理化指標(biāo)

*柱子：內(nèi)徑16mm、柱長(zhǎng)10cm，柱床高5cm，25℃，流動(dòng)相為0.1mol/LNaCl。

3包裝

產(chǎn)品以無(wú)菌試劑瓶密封包裝，外貼標(biāo)簽，注明“品名、體積、顆粒大小、應(yīng)用、生產(chǎn)單位"等內(nèi)容。所選用的包裝應(yīng)有利于保證產(chǎn)品質(zhì)量、方便運(yùn)輸和貯存。

4運(yùn)輸

運(yùn)輸中應(yīng)避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

5貯存

產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~30℃（保存溶液為20% 乙醇+0.1M醋酸鈉），通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。

用過(guò)的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。

6保質(zhì)期：

5年。

7應(yīng)用

苯基-瓊脂糖凝膠H.P.是一種疏水層析介質(zhì)，利用樣品中組分疏水性的不同進(jìn)行分離。用于生物大分子的純化分離。

下面簡(jiǎn)要介紹介質(zhì)的使用過(guò)程。

7.1裝柱

（1）讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。

（2）根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。

（3）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無(wú)氣泡。

（4）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

（5）打開蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

7.2平衡

讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH₄)₂SO₄等。

7.3上樣

（1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。

（2）一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

（3）介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng)，介質(zhì)對(duì)組分吸附牢。

7.4洗脫

疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫。加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫。最常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS。

7.5再生

一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。

若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

7.6在位清洗

（1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

（2）對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用1M NaOH 去除。

（3）對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。

7.7注意

在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。

7.8去熱源

用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)?；蛴靡韵路椒ú襟E去除：

（1）2倍柱體積的70%乙醇；

（2）2倍柱體積50mM Tris-Hcl pH7.5；

（3）1倍柱體積4M尿素；

（4）3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl；

上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。

7.9消毒用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。

特別注意：

上樣之前，樣品必須去除色素，否則色素會(huì)被吸附到填料上，影響填料的正常使用。

備注：產(chǎn)品信息可能會(huì)有優(yōu)化升級(jí)。請(qǐng)以實(shí)際標(biāo)簽信息為準(zhǔn)。

苯基-瓊脂糖凝膠H.P.

苯基-瓊脂糖凝膠H.P.