試劑盒組成：

1， 封閉液（5%BSA）： 10ml。

2， Bio-羊抗兔IgG濃縮液： 100ul。

3， SABC-AP濃縮液： 100ul。

4， 稀釋液： 30ml。

5， 1×AP反應(yīng)緩沖液： 30ml

6， 25×BCIP： 1ml 25×NBT： 1ml

產(chǎn)品說明： 本試劑盒適合于一抗為兔IgG的免疫組化實(shí)驗(yàn)AP顯色。 SABC是專為免疫組化和其他免疫檢測而設(shè)計的，用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，同親和素一樣，對生物素有極高的親和力，親和素是一個堿性蛋白質(zhì)（IP=10），經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性，對組織和細(xì)胞的非特異吸附很低，基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大約可形成一百個左右的過氧化物酶和五十個左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物。大量的酶將保證SABC具有很高的敏感性。

實(shí)驗(yàn)步驟：（以石蠟切片為例，僅作參考）1. 切片常規(guī)脫蠟至水(三次二甲苯，三次乙醇)。2. 可選步聚：a、熱修復(fù)抗原， b、酶消化， c、跳過此步，直接進(jìn)入下一步。3.  滴加5%BSA封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體, 不洗。4.  用稀釋液將一抗按一定比例稀釋（稀釋后的一抗4℃可保存一周），也可另行購買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗37 ℃ 1小時左右或20℃時2小時左右。也可4℃過夜。PBS（pH7.2-7.4）洗2分鐘×3次。（一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。具體稀釋度和孵育時間參考一抗生產(chǎn)廠家說明書。）5． 根據(jù)用量，用稀釋液將Bio-羊抗兔IgG濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul Bio-羊抗兔IgG濃縮液混勻。此工作液4℃可保存一周).滴加Bio-羊抗兔IgG工作液,20-37℃ 30分鐘。PBS（pH7.2-7.4） 洗2分鐘×3次。6．根據(jù)使用量，用稀釋液將SABC-AP濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul SABC-AP濃縮液混勻。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-AP工作液，20-37℃，30分鐘。PBS （pH7.2-7.4）洗5分鐘×4次。7．根據(jù)用量，1ml AP緩沖液中加入40ul NBT溶液，混勻后再加入40ul BCIP溶液。此工作液現(xiàn)用現(xiàn)配。室溫顯色, 鏡下控制反應(yīng)時間。蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。* 對于冰凍切片，固定后，PBS漂洗兩次，接上述第二步。

注意事項： 如果染色背景過高，在SABC反應(yīng)之后，AP顯色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗滌切片4次，PBS洗2次，然后AP顯色。因?yàn)槊庖呓M化指標(biāo)眾多，標(biāo)本不一，此步驟僅作參考。

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標(biāo)題:miR-145 attenuates?phenotypic transformation of aortic vascular smooth muscle cells to prevent aortic dissection

成員:Zhi-Huang Qiu, Jian He, Tian-ci Chai, Yu-ling Zhang, Hao Zhou, Hui Zheng, Xiao-song Chen, Li Zhang, Yu-mei Li, Liang-wan Chen

論文因子:2.352 發(fā)表期刊:JOURNAL OF CLINICAL LABORATORY ANALYSIS pmid:34767671

注意：以上文獻(xiàn) 僅供參考

SABC(兔IgG)-AP?kit

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