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產(chǎn)品名稱:通用RT-PCR試劑盒(AMV)

產(chǎn)品型號(hào):RP1200

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):通用RT-PCR試劑盒(AMV)適用于各種 RNA制品的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)以及隨后的PCR擴(kuò)增。它采用AMV進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng),能夠獲得更長的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。

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RP1200通用RT-PCR試劑盒(AMV)的詳細(xì)資料:

通用RT-PCR試劑盒(AMV)

產(chǎn)品簡介:本試劑盒適用于各種 RNA 制品的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)以及隨后的 PCR 擴(kuò)增。它采用 AMV 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng),能夠獲得更長的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。同時(shí),在 25ul 反轉(zhuǎn)錄體系和 50ul PCR 反應(yīng)體系中,還可以一次性得到足夠量的 PCR 產(chǎn)物用于后續(xù)的克隆實(shí)驗(yàn)。本試劑盒中配置的酶均為進(jìn)口的酶。RT 酶采用進(jìn)口的 AMV,所以 cDNA 更長,基因的信息保留得更完整!反轉(zhuǎn)錄過程中特異的 RNase 抑制劑可有效降低由于外源 RNase 污染而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗的風(fēng)險(xiǎn)。本試劑盒使用方便、快捷,可廣泛用于 cDNA 克隆及目的基因檢測等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

操作步驟:

一、反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

1、在冰浴的無菌無 RNase 的離心管中加入如下反應(yīng)成分: 0.5ug RNA 模板 5ul Oligo(dT)16引物補(bǔ) RNase-free ddH2O 11.5ul 2、70℃保溫 5min 后迅速在冰上冷卻 5min,簡短離心收集反應(yīng)液后加入以下各組分: 5ul 5×AMV Buffer 2.5ul dNTPs 0.5ul RNasin 0.5ul AMV 補(bǔ) RNase-free ddH2O 25ul 3、42℃溫浴 60min,如果是用隨機(jī)引物,請(qǐng)將離心管置 37℃溫浴 60min。 4、反應(yīng)后將離心管置冰上,反應(yīng)產(chǎn)物可用于進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或-20℃保存。

二、PCR 反應(yīng)

1、按以下各組分配制 50ul PCR 反應(yīng)體系: 10×PCR Buffer 5ul dNTPs 1ul 上游引物(用戶自備 10um) 1ul 下游引物(用戶自備 10um) 1ul RT 反應(yīng)產(chǎn)物 2ul Taq Polymerase 0.5ul ddH2O x ul Total Volume 50ul 2、混勻后短暫離心,PCR 儀擴(kuò)增,瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。注意事項(xiàng): 1、用于 cDNA 合成反應(yīng)的相關(guān)試劑和耗材盡可能用 DEPC 進(jìn)行處理,并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時(shí),先用經(jīng)過滅菌的器具、水等配制溶液后,再將溶液進(jìn)行過濾除菌處理。 2、RNA 樣品要避免反復(fù)多次凍融,應(yīng)使 RNA 在冰浴中處于融化狀態(tài)。 3、如果 PCR 效果不理想,可以適當(dāng)優(yōu)化條件,比如改變退火溫度或增加模板量。相關(guān)產(chǎn)品: R1600 DEPC 處理水 SR0060 液相 RNase 清除劑 R1200 總 RNA 提取試劑盒 SR0080 RNAsaver RNA 長效保存液 R1050 5×RNA Loading Buf er RP1100 通用 RT-PCR 試劑盒(M-MLV) PC2440 Random PC2450 Oligo T16 D1020 10×DNA 上樣緩沖液 T1060 50×TAE 緩沖液

通用RT-PCR試劑盒(AMV)

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