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丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測(cè)試劑盒

丙酮酸脫氫酶(PDH)檢測(cè)試劑盒由北京索萊寶提供,北京索萊寶提供丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒測(cè)定意義,測(cè)定原理,使用方式,價(jià)格,英文名稱等信息。更多丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒信息請(qǐng)客服咨詢

產(chǎn)品型號(hào):BC0380
更新時(shí)間:2025-07-15
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
訪問量:3330
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丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測(cè)試劑盒

注意:正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

貨號(hào): BC0380

規(guī)格: 50T/48S

 

產(chǎn)品內(nèi)容:

試劑一:液體60mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體1mL×1 支,-20℃避光保存;

試劑三:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×1 支,4℃保存;

試劑五:粉劑×1 支,-20℃保存;

試劑六:粉劑×1 支,4℃保存;

試劑七:粉劑×1 支,4℃保存;

 

工作液的配制:臨用前把試劑四、五、六、七轉(zhuǎn)移到試劑三中混合溶解待用;用不完的試劑 4℃保存一周。

 

產(chǎn)品說(shuō)明:

     PDH(EC 4.1.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,催化丙酮酸脫梭生成羥乙基-TPP,把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來(lái)。PDH催化丙酮酸脫氫,同時(shí)還原2,6-二氯酚靛酚(2,6-DCPIP),從而導(dǎo)致605nm光吸收的減少。

 

需自備的儀器和用品:

     可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

 

操作步驟:

一、樣本的處理

    稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬(wàn)細(xì)胞,加入1mL 試劑一和 10μL試劑二,用冰浴勻漿器或研缽勻漿充分研磨,4 ℃ 11000 g離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

 

二、測(cè)定步驟

     1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng) 605nm,蒸餾水調(diào)零。

     2、每個(gè)樣本需要900μL工作液,按樣本數(shù)加一取出一定量的工作液于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其他物種)中孵育5min。

     3、空白管:在1mL比色皿中加入900 µL工作液和50µL水,混勻,立即記錄605nm處初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2,計(jì)算 ΔA空白=A1-A2。

     4、測(cè)定管:在1mL 比色皿中加入900 µL工作液和50µL樣本,混勻,立即記錄 605nm 處初始吸光值A(chǔ)3和1min后的吸光值A(chǔ)4,計(jì)算ΔA測(cè)定=A3-A4。

 

三、PDH 活性計(jì)算

    (1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

     單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

PDH活性(U /mg prot)=[(ΔA測(cè)定-ΔA空白)×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr)÷T

=904.762×(ΔA測(cè)定-ΔA空白)÷Cpr

    (2) 按樣本鮮重計(jì)算

     單位的定義:每g組織每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

PDH活性(U/g鮮重)=[(ΔA測(cè)定-ΔA空白)×V反總÷(ε×d)×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=913.81×(ΔA測(cè)定-ΔA空白)÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

     單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

     PDH 活性(U/104 cell)=[(ΔA測(cè)定-ΔA空白)×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=1.828×(ΔA測(cè)定-ΔA空白)

     V 反總:反應(yīng)體系總體積,9.5×10-4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù),2.1×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.05 mL;V 樣總:加入試劑一和試劑二體積,1.01 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)。

 

注意事項(xiàng):

1、測(cè)定過程中所有樣本在冰上放置,以免變性和失活。

2、測(cè)定管的ΔA值在0.01-0.25之間,若測(cè)定管的ΔA值大于0.25,需將樣本進(jìn)行稀釋。 

 相關(guān)文獻(xiàn):

《Engineering Corynebacterium glutamicum for high-titer biosynthesis of hyaluronic acid.》 作者:Fangyu Cheng,Huimin Yu,Gregory Stephanopoulos 期刊:Metab. Eng. 影響因子:7.808 PMID:31301358
 

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