普魯士藍染色試劑盒（伊紅法）

產(chǎn)品簡介：

含鐵血黃素(hemosiderin)是一種血紅蛋白源性色素，為金黃色或棕黃色顆粒，因其含鐵、金黃色，故稱為含鐵血黃素。當(dāng)紅細(xì)胞被巨噬細(xì)胞吞噬后，在溶酶體酶的作用下，血紅蛋白被分解為不含鐵的橙色血質(zhì)和含鐵的含鐵血黃素。Perls普魯士藍反應(yīng)(Prussian blue reaction)又稱為含鐵血黃素染色，常見于吞噬細(xì)胞內(nèi)或間質(zhì)內(nèi)，主要顯示三價鹽。Perls普魯士藍是非常經(jīng)典的組織化學(xué)反應(yīng)，是顯示組織內(nèi)三價鐵的一種敏感、傳統(tǒng)優(yōu)良的方法，：常用于顯示局部組織內(nèi)的各種出血性病變，常見于吞噬細(xì)胞內(nèi)。

在判斷含鐵血黃素沉積時，用Perls反應(yīng)可以得到證實, 該染色法可以很好地區(qū)分含鐵血黃素與其他色素。該染色液穩(wěn)定性好、可以長期保存、不易產(chǎn)生沉淀、應(yīng)用范圍廣，可以進行復(fù)染。 其復(fù)染液采用伊紅染色液，也是常用的復(fù)染液，該復(fù)染液染色時間較核固紅染色液要短。

普魯士藍染色試劑盒（伊紅法） 

操作步驟（僅供參考）：

（一）石蠟切片染色

1、 切片脫蠟水 ① 二甲苯(Ⅰ) 5～10min ② 二甲苯(Ⅱ) 5～10min ③無水乙醇(Ⅰ)（可選） 3～5min ④無水乙醇(Ⅱ)（可選） 3～5min ⑤95%的乙醇 3～5min ⑥90%的乙醇 3～5min ⑦80%的乙醇 3～5min ⑧自來水或蒸餾水沖洗(Ⅰ) 1～3min ⑨自來水或蒸餾水沖洗(Ⅱ) 1～3min

2、染色 ①切片入 Perls stain（見注意事項 6） 15～30min ②蒸餾水充分沖洗 5～10min ③伊紅染色液淡染細(xì)胞核 15～30s ④自來水沖洗 1～5s。

3、脫水、透明、封固 ①90%乙醇 10～20s ②95%乙醇(Ⅰ) 1～2min ③95%乙醇(Ⅱ) 1～2min ④ 無水乙醇(Ⅰ) 2～3min ⑤無水乙醇(Ⅱ) 2～3min ⑥ 二甲苯(Ⅰ) 2～3min ⑦二甲苯(Ⅱ) 2～3min ⑧ 二甲苯(Ⅲ) 2～3min ⑨中性樹脂封片。

（二）冰凍切片染色

1、 無需脫蠟，直接迅速用蒸餾水沖洗 2～3min。

2、 染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟。

（三）細(xì)胞染色

1、4%多聚甲醛固定 10～20min。

2、自來水沖洗 2 次，每次 2min。

3、蒸餾水沖洗 2 次，每次 2min。

4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟。

染色結(jié)果：含鐵血黃素或三價鐵 藍色細(xì)胞核、其他組織 紅色陰性對照（可選）取相同連續(xù)切片脫蠟水。置于 5%的草酸中，孵育 2-6h 后，經(jīng) Perla stain，需要步驟同上。結(jié)果為陰性。

注意事項： 1、 切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。 2、 組織固定常采用 10%的中性福爾馬林，經(jīng)普通福爾馬林長期固定后，組織會有損傷。 3、 臨用前取 A1、A2 液等量混合，即為試劑（A），現(xiàn)配現(xiàn)用，不可提前配制。 4、整個操作過程中容器要干凈，避免使用金屬鐵制品，洗切片和容器時以蒸餾水為宜，因普通水內(nèi)含鐵質(zhì)。 5、避免使用酸性固定劑，鉻酸鹽處理也會妨礙鐵的保存。 6、Perls stain 染色時，應(yīng)根據(jù)樣品情況調(diào)整著色時間。 7、所有檢查切片都應(yīng)使用同一個陽性對照切片,選擇適合的對照非常重要.尸檢肺組織是一個很好的對照,包含相當(dāng)數(shù)量的鐵陽性巨噬細(xì)胞(心衰細(xì)胞). 8、95%乙醇、90%乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液. 9、 冰凍切片和細(xì)胞的染色,應(yīng)根據(jù)具體情況摸索實驗條件. 10、 為了您的健康和安全,請穿實驗服并戴一次性手套操作.