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產(chǎn)品名稱:人外周血淋巴細胞分離液(FICOLL配制)

產(chǎn)品型號:P8900-200

產(chǎn)品報價:

產(chǎn)品特點:人外周血淋巴細胞分離液(FICOLL配制)一種用于分離人外周血淋巴細胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液

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P8900-200人外周血淋巴細胞分離液(FICOLL配制)的詳細資料:

人外周血淋巴細胞分離液(FICOLL配制)產(chǎn)品簡介:
本產(chǎn)品是一種用于分離人外周血淋巴細胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。其分離原理是根據(jù)血細 胞的密度差異(紅細胞和粒細胞密度為1.090g/mL左右;淋巴細胞和單核細胞密度為1.075~1.090g/mL;血小板為 1.030~1.035g/mL),通過離心使一定密度的細胞按相應密度梯度分布,從而將淋巴細胞從人外周血或臍帶血中分 離出來。

產(chǎn)品指標: 密度 1.077±0.001g/mL 滲透壓 290~350mOsm/kgH2O 無菌 0.1μm 濾膜過濾

人外周血淋巴細胞分離液(FICOLL配制)保存條件:
本產(chǎn)品對光敏感,應該室溫避光儲存,保質(zhì)期 2 年。無菌開封后,保存于室溫。

操作步驟:

1. 取新鮮抗凝全血(EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可)或者去纖維蛋白血液,用等體積的全血及組織稀釋液 或者PBS稀釋全血。

2. 在離心管中加入適量分離液(當稀釋后血液體積小于3mL時,加入3mL分離液;大于等于3mL,加入等體積 分離液。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二,否則會影響分離效果),將稀釋后的血液平鋪到分離 液液面上方,注意保持兩液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,然后將血液小心的平鋪于分離液 上,因為兩者的密度差異,將形成明顯的分層界面。如果樣品較多加樣時間較長,在離心之前出現(xiàn)紅細胞成 團下沉屬正?,F(xiàn)象。)

3. 室溫,水平轉(zhuǎn)子500~1000g,離心20~30min (血液的體積越大所需的離心力越大,離心 時間越長,佳的分離條件需摸索,離心轉(zhuǎn) 速大不超過1200g)。

4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層:上層是稀釋的 血漿層,中間是透明的分離液層,血漿與分 離液之間的白膜層即為淋巴細胞層,離心管 底部是紅細胞與粒細胞。

5. 小心的吸取白膜層細胞到15mL潔凈的離心 管中, 10mL PBS或細胞洗滌液洗滌白膜層 細胞。250g,離心10min。

6. 棄上清,5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞,250g,離心10min。

7. 重復步驟6

8. 棄上清,細胞重懸備用。

 

參考文獻:
《E2F1 mediates the downregulation of POLD1 in replicative senescence》 作者:Shichao Gao,Qiao Song,Jing Liu,Xiaomin Zhang,Xunming Ji,Peichang Wang 期刊:Cellular and Molecular Life Sciences 影響因子:7.014 PMID:30895337

 

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