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4×SDS-PAGE分離膠緩沖液 蛋白質(zhì)電泳

英文名稱 SDS-PAGE Separating Gel Buffer，4×(pH 8.8)

儲(chǔ)存條件 RT，有效期1年

本試劑是由Tris和SDS混合而成的，主要用于SDS-PAGE凝膠（變性聚丙烯酰胺凝膠）制備實(shí)驗(yàn)。配制分離膠時(shí)，10ml制膠體系中加入2.5ml（4倍稀釋）。

組分                              濃度

Tris-HCl（pH=8.8）    1.5mol/L

SDS                              0.4%（W/V）

注意事項(xiàng)：若有白色沉淀析出，可置于37℃水浴，析出溶解后再使用。

 PAGE凝膠銀染試劑盒主要用于聚丙烯酰胺凝膠電泳染色。其靈敏度比EB高200倍，該產(chǎn)品整個(gè)過程只需要20分鐘，操作簡單，靈敏度高，能檢測到10ng以下的DNA 條帶。下面就以索萊寶產(chǎn)PAGE凝膠銀染試劑盒介紹使用PAGE凝膠銀染試劑盒染色操作步驟，以及操作過程中需要的注意的問題。
操作步驟:
一、染色液配制
需要配制的染色液體積根據(jù)PAGE 膠的大小而定，一般的mini-PAGE 膠需要20-30mL。配制用的器皿清洗干凈后用去離子水涮洗，染色液須用去離子水配制，現(xiàn)用現(xiàn)配。如果配制的溶液體積不是100mL，可以按比例改變各成分用量。
1，硝酸銀染液：稱取0.2g 硝酸銀，加入到90ml 去離子水中*溶解，加入10ml 溶液A 混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。
2，顯色液：分別取溶液B 和溶液C 各10ml 加入80ml 去離子水中混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。
3，終止液：取終止液D 10ml 加去離子水稀釋100ml，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二、染色：
1，PAGE 電泳結(jié)束后，將PAGE 蛋白膠轉(zhuǎn)移玻璃平皿或搪瓷盤中，用去離子水漂洗兩遍，每次2min。
2，將PAGE 膠轉(zhuǎn)移硝酸銀染液中，使染液沒過PAGE 膠，室溫染色10min。可置于搖床上緩慢搖晃，使其染色均勻。
3，棄去染色液，用去離子水快速漂洗三次，每次半分鐘。
4，將PAGE 膠轉(zhuǎn)移顯色液中，使顯色液沒過PAGE 膠，室溫?fù)u晃顯色條帶清晰可見。
5，可選，將PAGE 膠轉(zhuǎn)移終止液中，終止顯色1min。
6，銀染后PAGE 膠可拍照保存或用于后續(xù)試驗(yàn)。

參考文獻(xiàn)：

《Role of Paraoxonase-1 in the Protection of Hydrogen Sulfide-Donating Sildenafil (ACS6) Against Homocysteine-Induced Neurotoxicity》 作者:Xiao-Qing Tang，Rong-Qian Chen，Ling Dong，Yan-Kai Ren，Duan-Fang Liao 期刊:Journal of Molecular Neuroscience 影響因子:3.412 PMID:22843253

4×SDS-PAGE分離膠緩沖液 蛋白質(zhì)電泳