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植物中脂氧合酶 (LOX)活性檢測試劑盒

LOX 廣泛存在于植物組織中，催化不飽和脂肪酸氧化反應，導致膜脂過氧化。在植物的生長發(fā)育、成熟衰老及逆境脅迫過程中具有重要作用。 LOX 催化亞油酸氧化，氧化產(chǎn)物在 234nm 處有特征吸收峰；測定 234nm 吸光度增加速率，來計算 LOX 活性。

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一、粗酶液提?。喊凑战M織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）進行冰浴勻漿。16000g，4℃離心 20min，取上清置冰上待測。二、測定： 1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上，調節(jié)波長到 234 nm，蒸餾水調零。 2. 試劑二在 25℃水浴中預熱 30 min 以上。 3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 蒸餾水、160μL 試劑二和 20μL 試劑三，迅速混勻后于 234nm 比色，記錄 15s 和 75s 的吸光值，分別記為 A1 和 A2。 4. 測定管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 上清液、160μL 試劑二和 20μL 試劑三，迅速混勻后于 234nm 比色，記錄 15s 和 75s 的吸光值，分別記為 A3 和 A4。三、LOX 活性計算： a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下（1） 按照蛋白濃度計算活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化 0.001 個單位為 1 個酶活單位。 LOX (U/mg prot) = [(A4－A3)－(A2－A1)]×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T×1000 = 10000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷Cpr Solarbio Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd /82 Http://www.solarbio。。ｃｏｍ 第 2頁，共 2 頁（2） 按照樣本質量計算活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化 0.001 個單位為 1 個酶活單位。 LOX (U/g) = [(A4－A3)－(A2－A1)]×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T×1000 = 10000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷W Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，需另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒； V 反總：反應體系總體積，200μL=2×10-4L；V 樣：加入反應體系中上清液體積，20μL=0.02mL；W ：樣品質量，g；V 樣總：上清液總體積，1mL；T：反應時間。 b. 使用 96 孔板測定的計算公式如下（1） 按照蛋白濃度計算 活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化 0.001 個單位為 1 個酶活單位。 LOX (U/mg prot) = [(A4－A3)－(A2－A1)]×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T×1000 = 10 000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷Cpr （2） 按照樣本質量計算 活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化 0.001 個單位為 1 個酶活單位。 LOX (U/g) = [(A4－A3)－(A2－A1)]×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T×1000 = 10 000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷W Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，需另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒； V 反總：反應體系總體積，200μL=2×10 -4L；V 樣：加入反應體系中上清液體積，20μL=0.02mL；W ：樣品質量，g；V 樣總：上清液總體積，1mL；T：反應時間。

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試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 2mL 試劑二，充分溶解。