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Solarbio 通用RT-PCR試劑盒（M-MLV）

操作步驟：

一、反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

1、在冰浴的無 RNase 的離心管中加入如下反應(yīng)成分： 1-5ug 總 RNA 或 50-500ng mRNA 2ul Oligo(dT)16或 2 pmole 基因特異性引物補(bǔ) RNase-free ddH2O 14.5ul

2、70℃保溫 5min 后迅速在冰上冷卻 2min，簡短離心收集反應(yīng)液后加入以下各組分： 4ul 5×M-MLV Buffer 1ul dNTPs 0.5ul RNasin 1ul M-MLV

3、42℃溫浴 60min，如果是用隨機(jī)引物，請(qǐng)先將離心管置 25℃溫浴 10min，再 42℃溫浴 60min。

4、95℃加熱 5min 終止反應(yīng)，置冰上進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或-20℃保存。

5、用 RNase-free ddH2O 將反應(yīng)體系稀釋到 50ul，取 2-5ul 進(jìn)行 PCR 反應(yīng)。

二、PCR 反應(yīng)

1、按以下各組分配制 50ul PCR 反應(yīng)體系： 10×PCR Buffer 5ul dNTPs 1ul 上游引物（用戶自備 10um） 1ul 下游引物（用戶自備 10um） 1ul RT 反應(yīng)產(chǎn)物 2ul Taq Polymerase 0.5ul ddH2O x ul Total Volume 50ul

2、混勻后短暫離心，PCR 儀擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。

注意事項(xiàng)：

1、 用于 cDNA 合成反應(yīng)的相關(guān)試劑和耗材盡可能用 DEPC 進(jìn)行處理，并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時(shí)，先用經(jīng)過滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進(jìn)行過濾除菌處理。

2、 試劑盒的各組分應(yīng)在-20℃保存，避免反復(fù)凍融，有效期 12 個(gè)月。

3、 RNA 樣品要避免反復(fù)多次凍融，應(yīng)使 RNA 在冰浴中處于融化狀態(tài)。

Solarbio 通用RT-PCR試劑盒（M-MLV）

產(chǎn)品簡介：本試劑盒適用于各種 RNA 制品的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)以及隨后的 PCR 擴(kuò)增。它采用 M-MLV 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，能夠獲得較長的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。同時(shí)，在 20ul 反轉(zhuǎn)錄體系和 50ul PCR 反應(yīng)體系中，還可以一次性得到足夠量的 PCR 產(chǎn)物用于后續(xù)的克隆實(shí)驗(yàn)。本試劑盒中配置的酶均為進(jìn)口的酶。RT 酶采用進(jìn)口的 M-MLV，所以 cDNA 更長，基因的信息保留得更完整！反轉(zhuǎn)錄過程中特異的 RNase 抑制劑可有效降低由于外源 RNase 污染而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗的風(fēng)險(xiǎn)。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于 cDNA 克隆及目的基因檢測(cè)等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。