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組織及血液酸性磷酸酶(ACP)活性檢測(cè)試劑盒

ACP 在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱(chēng)無(wú)機(jī)磷酸，常見(jiàn)于巨噬細(xì)胞的溶酶體內(nèi)。ACP 常用于前列腺癌的輔助診斷。在酸性環(huán)境中，ACP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚，苯酚與 4-氨基安替和鐵反應(yīng)生成紅色亞醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通過(guò)測(cè)定 510nm 吸光度增加速率，來(lái)計(jì)算 ACP 活性。

組織及血液酸性磷酸酶(ACP)活性檢測(cè)試劑盒

一、粗酶液提?。?稱(chēng)取約 0.1g 組織，加提取液 1mL 充分研磨，4℃、10000rpm 離心 10min，取上清液待測(cè)。血液可直接用于測(cè)定，如果濃度高的話(huà)，用提取液稀釋。

二、測(cè)定步驟：

1.分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 510 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一置于 37℃水浴中預(yù)熱 30 min 以上。試劑名稱(chēng)（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 空白管 標(biāo)準(zhǔn)管蒸餾水 - - 20 - 1μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)品 - - - 20 上清液 20 - - - 試劑一 40 40 40 40 試劑二 40 40 40 40 混勻后置于 37℃水浴中保溫 15min 試劑三 120 120 120 120 上清液 - 20 - - 混勻后于 510 nm 測(cè)定吸光度，分別記為 A 測(cè)定管、A 對(duì)照管、A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管。

三、ACP 活性計(jì)算： 1.按蛋白濃度計(jì)算活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 μmol 酚。 ACP(U/mg pr)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 樣]÷(Cpr×V 樣)÷T = (A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷Cpr 2.按樣本鮮重計(jì)算活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1 μmol 酚。 ACP 活力(U/g)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 樣] ÷(W÷V 提取×V 樣)÷T =0.067×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W 3.血液中 ACP 活性計(jì)算活性單位定義：37℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生 1μmol 酚。 ACP 活力(U)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 樣] ÷V 樣÷T =0.067×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) C 標(biāo)準(zhǔn)品：1μmol/mL； V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），0.02mL；V 樣總：1mL； T：反應(yīng)時(shí)間（min），15 min；V 提取：加入提取液體積，1mL；W：樣本鮮重，g。

組織及血液酸性磷酸酶(ACP)活性檢測(cè)試劑盒

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑三：液體 30mL×1 瓶，4℃避光保存，變成藍(lán)綠色不能使用。標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，1μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存