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談?wù)劸彌_液中甘氨酸的作用

更新時間:2022-08-09點擊次數(shù):1505
  甘氨酸同Tris(三羥甲基氨基甲烷)一起組成電泳緩沖液中的緩沖對,可以穩(wěn)定電泳過程中的PH值。在SDS-PAGE不連續(xù)電泳中,制膠緩沖液使用的是Tris-HCL緩沖系統(tǒng),濃縮膠是pH6.7,分離膠pH8.9;
 
  而電泳緩沖液使用的Tris-甘氨酸緩沖系統(tǒng)。在濃縮膠中,其pH環(huán)境呈弱酸性,因此甘氨酸解離很少,其在電場的作用下,泳動效率低;而CL離子卻很高,兩者之間形成導(dǎo)電性較低的區(qū)帶,蛋白分子就介于二者之間泳動。由于導(dǎo)電性與電場強度成反比,這一區(qū)帶便形成了較高的電壓梯度,壓著蛋白質(zhì)分子聚集到一起,濃縮為一狹窄的區(qū)帶。當(dāng)樣品進(jìn)入分離膠后,由于膠中pH的增加,呈堿性,甘氨酸大量解離,泳動速率增加,直接緊隨氯離子之后,同時由于分離膠孔徑的縮小,在電場的作用下,蛋白分子根據(jù)其固有的帶電性和分子大小進(jìn)行分離。
 
  緩沖液的配制及其保存:
 
  1.pH標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)保存在干燥的地方,如混合磷酸鹽pH標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在空氣濕度較大時就會發(fā)生潮解,一旦出現(xiàn)潮解,pH標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)即不可使用。
 
  2.配制pH標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)使用二次蒸餾水或者是去離子水。如果是用于0.1級pH計測量,則可以用普通蒸餾水。
 
  3.配制pH標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)使用較小的燒杯來稀釋,以減少沾在燒杯壁上的pH標(biāo)準(zhǔn)液。存放pH標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的塑料袋或其它容器,除了應(yīng)倒干凈以外,還應(yīng)用蒸餾水多次沖洗,然后將其倒入配制的pH標(biāo)準(zhǔn)溶液中,以保證配制的pH標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確無誤。
 
  4.配制好的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液一般可保存2—3個月,如發(fā)現(xiàn)有渾濁、發(fā)霉或沉淀等現(xiàn)象時,不能繼續(xù)使用。
 
  5.堿性標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)裝在聚乙烯瓶中密閉保存。防止二氧化碳進(jìn)入標(biāo)準(zhǔn)溶液后形成碳酸,降低其pH值。

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