想做免疫熒光不會(huì)細(xì)胞爬片怎么行？

更新時(shí)間：2021-05-21

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我們在檢測細(xì)胞蛋白定位或凋亡時(shí)（TUNEL），免不了要制作細(xì)胞爬片，細(xì)胞爬片的質(zhì)量會(huì)影響最后的圖片呈現(xiàn)效果及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。今天小編教大家如何制作更好的細(xì)胞爬片。

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（一）爬片準(zhǔn)備

1、爬片最好選用專用玻片。避免自己裁剪大小不一，以及玻璃的透明程度和吸附性都會(huì)影響最后的圖片效果。

2、根據(jù)自己的需要選擇合適大小的爬片，如6孔板、12孔板、24孔板。

3、選擇好孔板和爬片，用鑷子將爬片小心放到孔板中，注意無菌操作。放入玻片前，注意向孔板中滴加少量培養(yǎng)基，再放入玻片。目的是使培養(yǎng)皿與玻片間有更好的粘合力，避免出現(xiàn)在加入細(xì)胞懸液時(shí)玻片飄起，引起雙層細(xì)胞貼片。

（二）細(xì)胞準(zhǔn)備

1、如果是原代細(xì)胞，細(xì)胞分化時(shí)間較長，細(xì)胞分化好在進(jìn)行接種，不要在孔板里進(jìn)行分化。

2、如果是傳代細(xì)胞，需胰酶消化細(xì)胞后對細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算好鋪孔密度重懸到培養(yǎng)基中。

3、根據(jù)自己的需求，將計(jì)算好的細(xì)胞，鋪到孔板中。注意細(xì)胞不要太密，會(huì)影響后面拍照效果。

4、待細(xì)胞貼壁，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要正常進(jìn)行后面的藥物干預(yù)等試驗(yàn)。

5、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)束后需要及時(shí)固定細(xì)胞來進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)，避免細(xì)胞再進(jìn)行代謝反應(yīng)或死亡。

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