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DMEM培養(yǎng)基中DMEM粉劑配制方法步驟
2025-09-22
DMEM是現(xiàn)今細(xì)胞培養(yǎng)中比較常見(jiàn)的培養(yǎng)基之一，dmem培養(yǎng)基是建立在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研究出來(lái)的，它與MEM培養(yǎng)基相比較，DMEM培養(yǎng)基中加大了MEM培養(yǎng)基中各種成分的用量，下文主要介紹一下自己配制DMEM的方法。1制備新鮮三蒸水或Millipore超純水。2稱(chēng)取所需量的干粉培養(yǎng)基，加入約終體積一半的三蒸水中;若配制一個(gè)包裝的培養(yǎng)液，在將整個(gè)包裝的干粉倒入三蒸水后，需用水洗包裝袋內(nèi)面2次，倒入培養(yǎng)液中，以保證所有干粉都溶解成培養(yǎng)液。磁力攪拌或人工攪拌使之充分溶解。3根據(jù)包裝...
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簡(jiǎn)述tbst與pbst的區(qū)別及配置
2025-09-22
TBST是TBS+Tween的縮寫(xiě)，生物實(shí)驗(yàn)中提到的PBST是指PBS溶液加上Tween-20。那么tbst與pbst都有上面區(qū)別呢？tbst與pbst的區(qū)別：1、TBST的pH值隨溫度變化大一點(diǎn)，而PBST似乎容易有沉淀，若稀釋抗體后需要反復(fù)使用的話(huà)建議使用TBST溶解。2、兩種洗液用起來(lái)沒(méi)有什么區(qū)別，都是提供一個(gè)緩沖的PH值環(huán)境，加上吐溫20有助于蛋白的洗脫。PBST的磷酸鹽緩沖液加Tween-20，而TBST是Tris緩沖液加Tween-20。PBS溶液是指磷酸緩沖液(...
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剛果紅培養(yǎng)基的配方及原理
2025-09-22
纖維素剛果紅培養(yǎng)基用于纖維素分解菌的分離和鑒別，纖維素分解菌周?chē)屑t色分解圈。剛果紅培養(yǎng)基的配方：硝酸鈉1.0磷酸氫二鈉1.2磷酸二氫鉀0.9硫酸鎂0.5氯化-鉀0.5酵母浸出粉0.5酸水解酪蛋白0.5剛果紅0.2纖維素粉5.0瓊脂15.0pH值7.0±0.125℃剛果紅培養(yǎng)基的用法：稱(chēng)取本品25.3g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘,備用。纖維素剛果紅培養(yǎng)基篩選菌種的原理:1、剛果紅可以跟大分子多糖牢固結(jié)合。2、纖維素是大分子多...
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活性氧檢測(cè)試檢測(cè)的工作流程步驟
2025-09-10
活性氧檢測(cè)試檢測(cè)的工作流程步驟活性氧檢測(cè)試檢測(cè)流程：從探針加載到信號(hào)輸出探針加載（細(xì)胞預(yù)處理）步驟：將細(xì)胞接種于培養(yǎng)板（如96孔板），待貼壁后更換無(wú)血清培養(yǎng)基（避免血清干擾）。加入終濃度為5-20μM的探針（如DCFH-DA），37℃孵育20-30分鐘。關(guān)鍵點(diǎn)：探針濃度需優(yōu)化：過(guò)高導(dǎo)致背景噪聲，過(guò)低降低靈敏度。避光操作：熒光探針易被光淬滅，需用錫箔紙包裹培養(yǎng)板。ROS誘導(dǎo)（刺激處理）目的：人為提高細(xì)胞內(nèi)ROS水平，模擬病理或應(yīng)激狀態(tài)。常用刺激物：氧化劑：H?O?（100-50...
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RNA的提取方法大總結(jié)
2025-09-02
這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法原理：使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，經(jīng)過(guò)起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì)，進(jìn)行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質(zhì)在上清中。使用這種方法，不但能得到高質(zhì)量的RNA，而且能同時(shí)分離出細(xì)胞染色體DNA.本法對(duì)于冷凍時(shí)間長(zhǎng)、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不易分離的組織標(biāo)本以及富含RNA酶的組織細(xì)胞（如胰腺）的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質(zhì)量好和成功率高，已成為提取哺乳動(dòng)物細(xì)...
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從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段的原則和注意事項(xiàng)
2025-09-02
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，我們通常需要分離純化特定分子量的DNA片段，用于接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)，比如酶切、連接的工作。下面主要介紹從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段的原則和注意事項(xiàng)，其主要原則有兩項(xiàng)：1、去除DNA樣品中的雜質(zhì)：瓊脂糖是從瓊脂中提取出來(lái)的，其中含有較多的酸根和羥基多糖。目前大多數(shù)級(jí)別的瓊脂糖中含有硫酸酯多糖，這種物質(zhì)能抑制基因克隆中使用的多種工具酶的活性，如DNA限制性?xún)?nèi)切酶、連接酶等，在回收DNA時(shí)應(yīng)盡量減少這些物質(zhì)的污染。不管用哪種方法進(jìn)行回收DNA，都會(huì)用到2.5mol/L...
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幾種感受態(tài)細(xì)胞的用途、基因型和特點(diǎn)
2025-09-02
1、DH5菌株用途:克隆菌，用于分子克隆、質(zhì)粒提取。基因型:supE44△lacU169（?80lacZ△M15）hsdR17recAlendAlgyrA19thi-1relAl特點(diǎn):一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘性平板的抑制型菌株.其?80lacZ△M15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。recAl和endAl的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒的提取。2、TOP-10菌株用途：克隆菌，用于分子克隆，質(zhì)粒提取?；蛐停篎_m...
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核酸電泳之聚丙烯酰氨凝膠電泳
2025-09-02
核酸電泳，想必大家耳熟能詳?shù)木褪黔傊悄z電泳了。今天我們要來(lái)講講另外一個(gè)跑核酸的方法--聚丙烯酰氨凝膠電泳。對(duì)于聚丙烯酰氨凝膠電泳，想必大家第一反應(yīng)是蛋白質(zhì)的電泳，再就是伯樂(lè)的電泳設(shè)備了。是的，蛋白電泳和伯樂(lè)電泳設(shè)備都是我們熟悉的。來(lái)看看DNA的聚丙烯酰氨凝膠電泳吧。看看膠的配置有什么不同呢？20%的變性聚丙烯酰胺凝膠8ml；尿素3.36g，加入45%丙烯酰胺溶液3.56ml，5XTBE1.6ml，加熱是尿素溶解,加水至8ml，將兩者混勻后冷卻至室溫。再加入3-6ul的TE...
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